IBD的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，建立合適的IBD動(dòng)物模型對(duì)研究IBD的發(fā)病

機(jī)制及其治療措施具有重要意義。經(jīng)典的造模方法有：自發(fā)模型、遺傳模型、過繼轉(zhuǎn)移模型和誘導(dǎo)模型。這些模型都有其自身的缺點(diǎn)，例如操作步驟復(fù)雜、動(dòng)物死亡率高、發(fā)病機(jī)制與人發(fā)病機(jī)制相差較遠(yuǎn)等。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種具有抗凝血特性的化學(xué)大腸桿菌素，能夠刺激大腸上皮單層襯里受損，導(dǎo)致促炎性腸道內(nèi)容物（如細(xì)菌及其產(chǎn)物）擴(kuò)散到底層組織，引起結(jié)腸組織炎癥發(fā)生。DSS結(jié)腸炎模型快速、簡單、重復(fù)性和可控性高，是誘導(dǎo)急性、慢性和復(fù)發(fā)性腸道炎癥模型的常用造模手段。

DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎的機(jī)制與臨床結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制非常相近，是研究結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制的理想模型。通過不同濃度DSS反復(fù)交替作用誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型，可以通過控制藥物濃度和給藥次數(shù)，能夠有效減輕結(jié)腸損傷程度，降低該疾病模型的動(dòng)物死亡率。

DSS能夠成功誘導(dǎo)小鼠慢性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型, 其操作簡單, 結(jié)果穩(wěn)定可靠，不可遺傳，是一種安全有效的結(jié)腸炎造模方法。在實(shí)際運(yùn)用中, 更為推薦1%，2%濃度交替作用誘導(dǎo)炎癥發(fā)生。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇40 只健康雌性BALB/cJRj小鼠，體質(zhì)量20-25 g，5只/盒分配于SPF 級(jí)屏障系統(tǒng)中，溫度 (22±2) ℃，濕度50% ～ 60%，12 h 循環(huán)照明，小鼠自由攝取食、水。

1.2儀器與試劑 糞便隱血檢測試劑盒； EG1160石蠟包埋機(jī)( LEICA)。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型制備 用無菌水分別配置1%和2%的葡聚糖硫酸鈉（DSS）（wt/vol）。先給予動(dòng)物2％DSS劑量飲水5天，再給予1％DSS 劑量飲水10天，再給予2％DSS劑量飲水 7天。每天稱量小鼠體重和消耗的DSS量并記錄。每三天檢測一次小鼠糞便稠度改變和糞便出血跡象。根據(jù)小鼠體重減輕、大便黏稠度、腹瀉和大便出血的綜合得分計(jì)算疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI），用以評(píng)估結(jié)腸炎的臨床進(jìn)展。

2.2 標(biāo)本采集及處理 在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，稱取小鼠體質(zhì)量，用1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，仰臥位置于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，固定四肢，暴漏胸腹部，經(jīng)下腔靜脈采血。全血室溫靜置30 min后，3,000 rpm，4°C離心15 min，分離血漿，測定髓過氧化物酶（MPO）水平。解剖小鼠腹腔，取結(jié)腸組織，濾紙吸干后稱重，并測量結(jié)腸長度，取近端、中端或遠(yuǎn)端各一段結(jié)腸進(jìn)行石蠟包埋。其余結(jié)腸組織分裝于1.5 mL 離心管中，-80℃低溫保存。

一、疾病概述

炎癥性腸病（IBD）是一種病因不明、異常免疫介導(dǎo)的慢性腸道炎癥性疾病，它反復(fù)發(fā)作，甚至可以伴隨患者終生，包括克羅恩病以及潰瘍性結(jié)腸炎兩種疾病。在臨床上，IBD患者主要表現(xiàn)為反復(fù)的腹痛、腹瀉、黏液血便，甚至出現(xiàn)各種全身并發(fā)癥如視物模糊、關(guān)節(jié)疼痛、皮疹等。IBD也會(huì)增加腸道受累部位癌變的風(fēng)險(xiǎn)。隨著生活方式的改變，我國已經(jīng)成為IBD發(fā)病率最高的亞洲國家。目前，IBD治療藥物主要以降低炎癥、提高患者的生活質(zhì)量為主，但是這些藥物的副作用很大，且不能夠長期用于維持治療。動(dòng)物模型可以很好的模擬臨床發(fā)病過程以及病理生理改變，為探究IBD的發(fā)病機(jī)制和治療手段提供研究基礎(chǔ)。目前已經(jīng)開發(fā)出多種IBD動(dòng)物模型，主要包括自發(fā)模型、遺傳模型、過繼轉(zhuǎn)移模型和誘導(dǎo)模型。其中DSS誘導(dǎo)的急性和慢性結(jié)腸炎模型是IBD研究中應(yīng)用最廣泛的兩種誘導(dǎo)型動(dòng)物模型。

二、模型背景

1、造模因素信息

葡聚糖硫酸鈉誘導(dǎo)

2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

8-12周齡的雌性BALB/cJRj小鼠，體重20-25g

3、研究背景

炎癥性腸?。↖BD）是腸道的慢性緩解性炎癥性疾病[1]，包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎兩種疾病。其臨床癥狀主要包括腹部痙攣、血性腹瀉和體重減輕，并伴隨有多種腸外癥狀[2]。目前IBD的病因尚不清楚，為了研究IBD的發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)在已經(jīng)開發(fā)出多種結(jié)腸炎的動(dòng)物模型，模型范圍從某些物種的易感菌株自發(fā)產(chǎn)生的模型到施用特定濃度的誘導(dǎo)化學(xué)品的模型[3]。這些模型是不可或缺的工具，可以用于探究IBD的潛在發(fā)病機(jī)制以及評(píng)估藥物的治療效果。在各種化學(xué)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中，由于葡聚糖硫酸鈉鈉（DSS）誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型操作簡單，并且與臨床結(jié)腸炎有許多相似支，因此該模型是IBD最常用和最好描述的模型[3]。

葡聚糖硫酸鈉（DSS），是一種帶負(fù)電的水溶性硫酸多糖，分子量高度可變，范圍為5-1400 kDa[4]。作為一種具有抗凝血特性的化學(xué)大腸桿菌素，DSS誘導(dǎo)腸道炎癥的機(jī)制是由于大腸上皮單層襯里受損，導(dǎo)致促炎性腸道內(nèi)容物（如細(xì)菌及其產(chǎn)物）擴(kuò)散到底層組織，導(dǎo)致腸道組織病理性改變[5]。DSS結(jié)腸炎模型制作方式簡單、誘導(dǎo)周期短、具有良好的模型重復(fù)性和可控性，因此在IBD研究中非常流行。通過改變DSS的給藥濃度和給藥頻率，可以建立急性、慢性和復(fù)發(fā)性腸道炎癥模型。

為了開發(fā)針對(duì)腸道炎癥模型治療的新靶點(diǎn)藥物，根據(jù)不同濃度DSS給藥方案，在飲用水中施用DSS會(huì)產(chǎn)生慢性或急性結(jié)腸炎。我們通過控制DSS藥物誘導(dǎo)濃度和給藥次數(shù)，改善了結(jié)腸損傷程度,有效降低了該疾病模型的動(dòng)物死亡率。

[1]Podolsky DK. Inflammatory bowel disease.N Engl J Med.2002; 347: 417–429.

[2] Sands, B.E. From symptom to diagnosis: clinical distinctions among various forms of intestinal inflammation.Gastroenterology.126.

[3]Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., & Neurath, M.F . Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.Nat. Protoc.2, 541-546(2007).

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[5] Laroui, H., Ingersoll, S.A., Liu, H.C., Baker, M.T.,Ayyadurai, S., Charania, M.A., Laroui, F., Y an,Y ., Sitaraman, S.V ., and Merlin, D. 2012. Dextran sodium sulfate (DSS) induces colitis in miceby forming nano-lipocomplexes with medium-chain-

length fatty acids in the colon.PLoS ONE.7:e32084