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自體血注射非人靈長類腦出血模型

健明迪檢測提供的自體血注射非人靈長類腦出血模型,討論與結論 動物癥狀觀察: 表現為體重減輕、弓背豎毛,在回輸后的一個月后死亡,具有CMA,CNAS認證資質。
自體血注射非人靈長類腦出血模型
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討論與結論

動物癥狀觀察:

表現為體重減輕、弓背豎毛,在回輸后的一個月后死亡。

生物安全性

實驗中涉及動物的操作程序已經得到中國醫學科學院醫學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(ILAS-GC-2012-001)。

評價驗證

2.1 行為學評價:術后1、2、3、7、14、21、28d內,使用經過修改、細化的Kito靈長類動物神經功能損害評分表對模型動物進行意識、骨骼肌肉協調、感覺系統、意識系統的行為學相關測試。術后1、2、3、7、14、21、28d,動物的平均行為學得分為28.97±1.29 、27.01±2.87、24.93±1.89、23.65±1.33、23.01±2.87、22.98±1.56、22.87±1.44分,8只動物在麻醉蘇醒后均出現了與血腫部位相對應的神經系統定位體征。主要表現為動物蘇醒后表現為有意識但情緒低落且不反抗。骨骼肌出現共濟失調。對腳趾疼痛有弱的、不完全的 、不協調的收縮反應。左前肢出現明顯的麻痹,失去運動能力。

2.2 影像學檢查:

1)頭顱MRI掃描:造模后24h,以后每周一次進行MRI檢查,觀察血腫及周圍的水腫、血腫情況;儀器型號:Philips Intera Achiva 3.0T磁共振儀,8道頭部線圈。將動物麻醉后固定于免磁的頭架上,放入頭部線圈內。T1掃描序列為IR,視野:120mm,TR/TE:2153ms/13/ms,層厚/間隔:3mm/0.3mm,矩陣256X256。MRI掃描可見血腫腔位于右側基底節區,為等T1短T2信號急性期血腫影,周圍有長T1長T2信號薄環形水腫影,中線向左側移位。右側側腦室明顯受壓變形,右側殼核,丘腦受壓變形。

2)18F-FDG-PET頭顱掃描:儀器:SiemensECAT EXACT HR+ 型高分辨PET儀(32環BGO晶體,空間分辨率5mm)。造模后24h及7、14、21、28d進行PET掃描。方法:動物麻醉后從股靜脈注入 37-47MBq(1.0-1.3mCi)的 18F-FDG,30min后行PET檢查,采用3D采集模式,掃描時間10min。以血腫最大層面為測量層面,分別先取基底節核團、血腫周圍及各腦葉RIO。觀察血腫周圍能量代謝情況。結果可見右側基底節區注血部位大片代謝缺損區,注射周圍大腦皮層、右側殼核與對側相應結構比較SUV值明顯降低,血腫側丘腦、尾狀核SUV值亦較對側減低。

2.3 組織病理學檢查:造模2w、4w后處死動物,動物麻醉后開胸,經生理鹽水及10%中性福爾馬林心臟灌注后,取腦組織進行固定、切片,通過H.E染色、特殊染色等染色方法觀察出血灶周圍的病理學改變。大體解剖未見異常。鏡下:大部分損傷部位的腦組織已被多量吞噬含鐵血黃素的泡沫細胞所取代,其間尚可見少許未被吸收的血液。損傷局部周圍可見多量泡沫細胞、淋巴細胞及單核巨噬細胞浸潤,部分損傷腦組織已被肉芽組織機化。其余組織未見異常。

制備方法

1、模型制作

1.1術前12h禁食,6h禁水。取股動脈抗凝血3ml(肝素鈉40單位/ml)后,氯胺酮15mg/kg對動物進行麻醉,當動物出現呼吸淺慢、角膜反射遲鈍,為麻醉適度表現。

1.2立體定向術:麻醉后的動物采用俯臥位固定在立體定位儀上,顱頂區備皮,常規消毒手術區皮膚,沿矢狀面在顱頂正中切開長約4-5cm的切口,逐層分離皮下組織、帽裝肌腱、肌肉、骨膜,用擴張器充分暴露手術視野。根據食蟹猴腦立體定位圖譜定位穿刺針,其初始坐標為Antero-posterior 2.6,depth18.2,lateral 48.5.用記號筆在進針處做好標記。使用便攜式顱鉆進行顱骨鉆孔,以鉆透顱骨,達硬腦膜為止(有落空感)。用浸透生理鹽水的無菌紗布覆蓋傷口。

1.3 吸取抗凝血1.5ml,將注射器固定在操作壁上,使用7號穿刺針沿定向孔進針將動脈血注射至右側基底節區屏狀核內側,每5分鐘注射0.5ml,每次注射間隔5min,注射完畢后留針15min。

1.4 拔出穿刺針,縫合骨膜、皮膚。術后3d肌肉注射青霉素40萬U預防感染。

研究背景

一、疾病名稱

出血性腦卒中(IntracerebralHemorrhage,ICH)

二、ICH簡介

腦出血(IntracerebralHemorrhage,ICH)是指小動脈、毛細血管破裂等原因引起的原發性非外傷性腦實質內出血,具有發病率高、病死率高、致殘率高的特點。

病因:常見病因是高血壓合并小動脈硬化,微動脈瘤或者微血管瘤,其他包括腦血管畸形、腦膜動靜脈畸形、淀粉樣腦血管病、囊性血管瘤、顱內靜脈血栓形成、特異性動脈炎、真菌性動脈炎,煙霧病和動脈解剖變異、血管炎、瘤卒中等。

臨床癥狀:運動和語言障礙、嘔吐、意識障礙、眼部癥狀、頭痛頭暈等。

治療:世界范圍內腦出血的患病率為10-20/10萬并隨著年齡的增長而升高。ICH發病后30天內的死亡率為35%-52%,其中半數的患者發病后2天內死亡,僅38%的患者ICH后存活超過1年。即使能夠存活,生活質量也受到影響。目前內科處理措施多為降血壓、降顱壓、激素治療;外科治療主要為手術清除顱內血腫。

模型信息

中文名稱:自體血注射非人靈長類腦出血模型

英文名稱:NA

類型:出血性腦卒中動物模型

分級:NA

用途:用于出血性腦卒中(Intracerebral Hemorrhage,ICH)研究。

研制單位:中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

保存單位:中國醫學科學院醫學實驗動物研究所

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