給予動物鼠籠傾斜、潮濕墊料、高溫、噪音、束縛、電擊、游泳、晝夜節(jié)律顛倒等不同刺激因子，且刺激因子安排為多變性和不可預(yù)測，可誘導(dǎo)性是模型制造成功的關(guān)鍵。該模型被廣泛用于抑郁癥神經(jīng)生物學(xué)機制及抗抑郁藥物的研究，以及伴發(fā)的焦慮、學(xué)習(xí)記憶障礙及防護(hù)藥物研究。

本研究中，通過水迷宮實驗、避暗實驗結(jié)果可以看CUMS模型組水迷宮尋臺潛伏期顯著性延長，避暗錯誤次數(shù)顯著性增加、避暗潛伏期顯著性減少等，這些行為學(xué)結(jié)果，提示大小鼠CUMS模型成功。此外本實驗還對CUMS模型的機制進(jìn)行了基礎(chǔ)研究，認(rèn)為CUMS模型會導(dǎo)致動物皮層的5-HT、DA、Ach、NE等神經(jīng)遞質(zhì)水平顯著性降低（P<0.05）。因此我們認(rèn)為采用慢性不可預(yù)測應(yīng)激，35天可以造成大鼠和小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙。

模型技術(shù)難點在于對于CUMS刺激因子的選擇，刺激因子的選擇可能影響實驗?zāi)Ｐ偷某晒εc否，常用的刺激因子有禁食(12 h)、禁水(12 h)、冷水游泳(4 °C，5 min)、熱水游泳(42 °C，5 min)、動物叫聲(0.5 h)、束縛(使用自行研發(fā)的小鼠行為限制器，長20 cm，直徑7 cm)、晝夜顛倒、配對飼養(yǎng)、濕籠、傾籠等。每日選擇2~3 種刺激，并盡量使應(yīng)激程序符合不可預(yù)測的特點，以避免動物產(chǎn)生適應(yīng)性。相同的刺激因子應(yīng)該隔3-7日再進(jìn)行。

本研究通過不同的刺激因子對老鼠造成慢性不可預(yù)測應(yīng)激模型，通過水迷宮、避暗等經(jīng)典行為學(xué)指標(biāo)，以及5-HT、DA、Ach、NE等神經(jīng)遞質(zhì)基礎(chǔ)機制指標(biāo)，表明了慢性不可預(yù)測應(yīng)激誘導(dǎo)老鼠學(xué)習(xí)記憶損傷模型的成功，并且該模型對于大小鼠具有相同的效果，本模型可用于進(jìn)一步的改善學(xué)習(xí)記憶藥物的藥效學(xué)評價。

本實驗采用健康成年SPF級老鼠。飼料墊料均為高壓滅菌產(chǎn)品，購自北京維通利華實驗動物有限公司，動物用水均經(jīng)過除菌處理。實驗動物以完整的包裝直接進(jìn)入實驗室，觀察適應(yīng)5天后無異常情況，方進(jìn)行實驗。實驗過程中動物操作均符合動物倫理學(xué)規(guī)范，對環(huán)境和生態(tài)影響等符合國家相關(guān)法律規(guī)定。

1. 不同時長社會挫敗對懸尾不動時間的影響

可以從圖1 看出，社會挫敗造模21天后，模型組與空白組存在顯著性差異，陽性藥組可以顯著性降低懸尾不動時間（P < 0.05）。

圖1 不同時長社會挫敗對懸尾不動時間的影響

2. 社會挫敗對強迫游泳不動時間的影響

可以從圖1 看出，社會挫敗造模7天，強迫游泳不動時間就比空白組出現(xiàn)顯著性增加（P< 0.05），但是造模14天并沒有出現(xiàn)顯著性差異（P > 0.05），造模21天后又出現(xiàn)顯著性差異（P < 0.05）。

圖2 不同時長社會挫敗對強迫游泳不同時間的影響

C57BL /6J小鼠。雄性多見。

1. 操作流程

實驗前將小鼠隨機分為對照組和應(yīng)激組，每天將應(yīng)激組C57BL /6 小鼠作為侵入者放入長期單獨飼養(yǎng)CD1 小鼠的籠內(nèi)，進(jìn)行身體接觸5 min。5 min 內(nèi)C57BL /6 小鼠將受到CD1小鼠攻擊并表現(xiàn)出逃跑、恐懼、順從等從屬性特征。5 min 身體接觸后，使用透明并且有很多小孔的有機玻璃板將二者隔開進(jìn)行心理應(yīng)激24 h，保證C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠，聽到CD1 小鼠的聲音，而且能聞到CD1 小鼠的氣味，應(yīng)激持續(xù)7d或21 d。應(yīng)激結(jié)束后，將C57BL /6 小鼠單獨飼養(yǎng)，進(jìn)行行為學(xué)評價。

為了評估應(yīng)激組C_57小鼠的社會交互行為，在接受最后一次攻擊的24小時內(nèi)開展社會交互實驗。實驗設(shè)備還包括40cmx40cmx40cm大小的白色開放場，7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及錄像設(shè)備。社會交互測試由兩部分組成，每部分記錄時長為2.5分鐘。第一部分，將塑料空盒置于測試場一側(cè)中央位置，輕輕提放被測試者(C57小鼠)于曠場中央，自由活動; 150秒后，將被測試者移除放于自身飼養(yǎng)籠中;同時將具有攻擊性的CD1小鼠放在塑料盒內(nèi)，準(zhǔn)備結(jié)束后重新放入被測試者。前后兩次操作中間的準(zhǔn)備時間控制在30s內(nèi)。分別記錄2個部分動物在社會交互區(qū)的時間。社會交互區(qū)定義為以塑料盒為中心，允許C_57小鼠與盒子及里面的CD1鼠進(jìn)行互動的區(qū)域。

2. 模型分析指標(biāo)

2.1 懸尾實驗

于造模結(jié)束后第3 天開始實驗。將膠布貼于距小鼠尾尖部約1 cm 處，使小鼠倒掛于懸尾箱支架上，傳感器接收小鼠掙扎時的張力變化信號，將信號處理轉(zhuǎn)化后送往計算機，小鼠懸尾實時檢測分析處理系統(tǒng)自動記錄小鼠不動時間，實驗總共6 min，適應(yīng)2 min 后系統(tǒng)自動統(tǒng)計小鼠后4 min 內(nèi)懸尾累積不動時間(“不動”即小鼠停止掙扎不動或無任何活動)。

2.2 強迫游泳

利用計算機圖像實時檢測分析處理系統(tǒng)自動分析記錄動物運動狀態(tài)。將小鼠放入小鼠強迫游泳儀器中( 高20 cm，直徑18 cm，水深12 cm)，保持水溫(23~25 °C)。動物適應(yīng)2 min后，系統(tǒng)自動記錄動物后4 min 內(nèi)的累積不動時間( 不動狀態(tài)即小鼠四肢有輕微動作以保持頭部在水面，小鼠呈現(xiàn)出停止掙扎或呈漂浮狀態(tài))。

抑郁癥是由抑郁癥是一種嚴(yán)重影響人體健康的精神疾病，其患病率約占總?cè)丝诘?%。世界衛(wèi)生組織預(yù)測到2020年抑郁癥將成為第二大主要疾病之一，給社會帶來極大經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，抑郁癥已成為全世界共同面臨的衛(wèi)生健康難題。近年來研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激性生活事件是抑郁癥的顯著促發(fā)因素，引發(fā)抑郁的主要原因是來自慢性、低強度、長期的日常壓力。

目前，抑郁癥尤其是中重度抑郁癥的主要治療手段仍是藥物治療。20多年以來，隨著人們對抑郁癥機制研究的深入，抗抑郁藥物的研究開發(fā)也取得了極大進(jìn)步。由于合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、不良反應(yīng)大、藥價高和易復(fù)發(fā)等缺陷，人們逐漸把目光投向傳統(tǒng)的中醫(yī)藥。傳統(tǒng)藥物和天然藥物作為抗抑郁候選藥物的研究開發(fā)已日漸成為國內(nèi)外的熱點。

采用社會失敗應(yīng)激，更好地模擬人類抑郁癥的發(fā)生方式，建立動物模型對于探索抑郁癥的病因?qū)W是很有必要的。另外，社會失敗應(yīng)激所導(dǎo)致興趣缺失和社會逃避的抑郁行為是長久潛伏的，通過慢性而不是急性的抗抑郁治療可以糾正社會失敗應(yīng)激所致的抑郁行為，我們的相關(guān)研究結(jié)果也與此一致(將另文報道)。通過社會失敗應(yīng)激模型，可以建立穩(wěn)定的用于研究抑郁病理生理學(xué)的動物模型。