1.該模型制備比較成熟，國內(nèi)外都有此模型，構(gòu)建和評價指標(biāo)一致，所以該模型應(yīng)用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關(guān)鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用價值。

1、1. SIVmac251直腸感染恒河猴血漿病毒載量結(jié)果

直腸途徑接種SIVmac251病毒后，恒河猴血漿病毒載量均轉(zhuǎn)為陽性，即在感染后病毒載量持續(xù)升高，14天病毒載量達到高峰，約107copies/mL左右，一直到35天均處于106-107 copies/mL的較高水平，隨后載量下降并維持在104-105 copies/mL這一水平。

圖1 SIVmac251直腸途徑感染恒河猴血漿病毒載量結(jié)果

Fig.1 The viremia (viral RNAcopies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaques infected intrarectallywith SIVmac251

1、 2. SIVmac251直腸感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值結(jié)果

感染猴CD4+/CD8+的比例在感染后出現(xiàn)持續(xù)下降，出現(xiàn)倒置現(xiàn)象。1006075和1007054分別于第14天、第21天將至最低點，數(shù)值分別為0.39和0.5。隨后1007054的CD4+/CD8+的比例回升至1，此后一直在0.9上下波動；而1006075回升至1，后又降至0.5，此后一直維持在該水平。

圖2 SIVmac251直腸途徑感染恒河猴外周血CD4+/CD8+比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytes in Chinese-original rhesus macaquesinfected intrarectally with SIVmac251

1、 3. SIVmac251直腸感染恒河猴CD4+和CD8+細胞絕對數(shù)結(jié)果

兩只恒河猴CD4+細胞絕對數(shù)在SIVmac251感染后發(fā)生應(yīng)激性增高，然后出現(xiàn)明顯的大幅下降，隨后又在短期內(nèi)迅速反彈，并最終在40天前后達到相對穩(wěn)定的狀態(tài)。外周血中CD8+細胞變化不盡相同，經(jīng)過急性期的劇烈震蕩后，1007054猴在感染28天后水平基本穩(wěn)定，1006075猴在感染28天后CD8+T細胞數(shù)量持續(xù)升高。

圖3 SIVmac251直腸途徑感染恒河猴外周血CD4+ 和CD8+細胞絕對數(shù)變化

Fig.3 TheCD4+ cell counts and CD8+ cellcounts (per l blood) in Chinese-original rhesus macaques infecte intrarectallywith SIVmac251

1、 實驗用病毒：感染毒株為SIVmac251中國恒河猴細胞適應(yīng)株，中國恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度為5×104 TCID50/mL。

2、 感染動物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實驗前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關(guān)的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結(jié)果為陰性。所有感染動物必須在ABSL-3室中進行。

3、 感染方法：將麻醉好的實驗猴放在操作臺上，動物采取俯臥位以保證直腸粘膜充分暴露，緩慢將10000TCID50的SIVmac251病毒液2mL注入肛竇處，實驗猴保持此姿勢30min。

4、 SIVmac251直腸感染猴樣品采集和指標(biāo)測定：在感染前和感染后3、7、10、14、21、28、35、42、56、70、84天采集EDTA抗凝血4mL，分別測定血常規(guī)、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+和CD8+細胞絕對數(shù)。

5、 SIVmac251直腸感染猴血漿病毒載量的測定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實時熒光定量RT-PCR方法測定血漿病毒載量。

6、 SIVmac251直腸感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對數(shù)測定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標(biāo)記EDTA抗凝全血淋巴細胞，流式細胞儀測定CD4+/CD8+比值，并根據(jù)血常規(guī)結(jié)果，計算出CD4+和CD8+細胞絕對數(shù)。

艾滋病(AcquiredImmunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害為特征的傳染性疾病，是20世紀(jì)危害人類健康和生命最嚴(yán)重的病毒性疾病之一。自美國CDC報道首例艾滋病后，到20世紀(jì)80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬人，2014年新增感染者200萬，2014年因艾滋病死亡120萬人。艾滋病在1985年傳入我國，截至2015年5月31日，歷年累計報告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會熱點問題，艾滋病的預(yù)防與治療也成為當(dāng)代生物醫(yī)學(xué)研究的前沿?zé)狳c之一。

艾滋病動物模型簡介

艾滋病發(fā)病機制研、藥物和疫苗的保護性研究及評價等方面在很大程度上依賴?yán)硐氲膭游锬Ｐ汀Ｈ藗儼l(fā)現(xiàn)HIV以后，用HIV感染過多種動物，但由于種種原因，結(jié)果并不理想。研究發(fā)現(xiàn)猴免疫缺陷病毒(SIV)感染實驗用猴的模型效果比較理想，表現(xiàn)為和AIDS的臨床表征，發(fā)病過程、免疫缺陷特征等非常相似，加之HIV和SIV有一定的基因同源性，人和猴的生物學(xué)特性也較其他動物接近，因而，SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應(yīng)用。

SIV是猴獲得性免疫缺陷綜合征（SimianImmune Deficiency Syndrome，SAIDS）的主要致病病毒，為典型的C型病毒粒子，基因組長度大約為9.2kb，基因組成同HIV-1和HIV-2基本相同，其完整的原病毒基因含有二個LTR以及同HIV類似的基因：gag、pol、vif、tat、rev、env和nef。所有基因在SIV的排列順序同HIV完全一樣。目前國內(nèi)外對SIV的研究多集中在非克隆株SIVmac251和克隆株SIVmac239上，因為這兩個病毒株能在多種獼猴屬動物身上引發(fā)致死性免疫缺陷綜合征，同時伴有CD4+淋巴細胞下降，繼發(fā)機會性感染病毒性腦膜腦病。這些都與人類AIDS類似。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經(jīng)血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動物模型的制備首先要考慮其實際應(yīng)用價值，最好的動物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為模擬同性間性傳播的感染方式，通過直腸粘膜上皮途徑感染，病毒直接感染M細胞、上皮細胞等。直腸的生理構(gòu)造及上皮細胞厚度非常薄等特點，都使直腸感染較陰道感染容易發(fā)生。將病毒緩慢注入猴直腸內(nèi)，可建立同性性傳播動物模型。