樣品的采集是微生物檢驗(yàn)的重要組成局部，用于檢驗(yàn)的樣品數(shù)量和狀況具有重要意義。這對(duì)取樣人員和制樣人員提出了很高的專業(yè)要求，既要保證樣品的代表性和分歧性，又要保證整個(gè)微生物檢驗(yàn)進(jìn)程在無菌操作的條件下停止。小編整理了局部微生物檢測(cè)進(jìn)程中取樣、樣液制備、稀釋、接種、培育的復(fù)雜操作，大家一同窗習(xí)參考。

一、微生物取樣及樣液制備

1 樣品標(biāo)識(shí)

取樣時(shí)，將樣品按不同的污染水平從低污染水平到高污染水平順序陳列，

并對(duì)出對(duì)應(yīng)的標(biāo)識(shí)，其中按細(xì)菌數(shù)平皿、大腸菌群平皿、金黃色葡萄球菌平皿的順序，2-3個(gè)樣品一摞。如圖

2 樣品采取

（1）固體樣品

① 開啟部位及其周圍用酒精棉停止消毒，再用火焰滅菌的剪刀剪開，如圖

② 在電子稱上放入無菌均質(zhì)袋（手不要碰及袋口）去皮調(diào)整至零，如圖4

③ 用火焰滅菌后的剪刀和鑷子取樣，稱取25g樣品，如圖

④ 參與225ml滅菌磷酸鹽緩沖液（開蓋瓶塞時(shí)瓶口部和瓶塞應(yīng)在火焰經(jīng)過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌）后，均質(zhì)或待均質(zhì)，如圖

⑤ 擦拭潔凈剪刀鑷子后浸泡于75%酒精容器中并將樣品封口；將袋子折疊后用拍擊式均質(zhì)器均質(zhì)約30秒作為樣液，此時(shí)均質(zhì)袋內(nèi)要設(shè)定為不含空氣（可依據(jù)樣品不同狀況相應(yīng)調(diào)整均質(zhì)時(shí)間），如圖

（2）液體樣品

①冷凍樣品完全解凍后運(yùn)用。

②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，用滅菌吸管取充沛混合后樣25ml。

③ 同上 ④ ⑤。

(3) 粉末狀樣品以及半固體樣品

①將樣品混合均一化。

②75%酒精棉消毒開啟部位及其周圍，再用火焰滅菌的剪刀開啟，以無菌匙采取混合后樣10g。

③參與90ml滅菌磷酸鹽緩沖液，開蓋瓶塞時(shí)瓶口部和瓶塞應(yīng)在火焰經(jīng)過1-2次，以殺滅從空氣中落入雜菌。

④ 同上⑤。

留意

1

從罐頭取樣時(shí)，在外表放上小塊酒精棉（倒上大批酒精）點(diǎn)火熄滅后開罐。罐頭起子用酒精棉擦拭火焰滅菌后運(yùn)用。

2

75%酒精必需保證一周換3次，假設(shè)容器內(nèi)有清楚的污物應(yīng)立刻改換；火焰滅菌的剪刀、鑷子經(jīng)過火焰4-5s即可

二、樣液稀釋方法

①?gòu)木|(zhì)袋準(zhǔn)確吸取樣液1ml，如圖

②沿管壁冉冉接種到含9ml磷酸鹽緩沖液里，蓋上試管塞后充沛震蕩混勻?yàn)?：100稀釋液。（勿使吸管*伸入稀釋液內(nèi)，以免吸管外部粘附的檢液溶于其內(nèi)。）

③重復(fù)該操作，按需求配制1：1000、1：10000…稀釋液。

④為增加樣品稀釋誤差，在延續(xù)遞增稀釋時(shí)（原液在前稀釋液在后），每一稀釋液應(yīng)充沛振搖，使其平均，同時(shí)每一稀釋度應(yīng)改換一支吸管。

⑤不要在稀釋劑中吹洗吸管。

留意

1

樣液稀釋必需加以足夠震搖，確保液體混勻，構(gòu)成的菌落能以10倍遞增或遞減，契合邏輯性

2

車間產(chǎn)品依據(jù)加工工藝或?qū)ξ廴緺顩r的估量選擇適宜的稀釋倍。（尤其留意蔥、姜、蒜等無加熱類產(chǎn)品、保管實(shí)驗(yàn)、外調(diào)新廠家、樣品開發(fā)、原料等樣品）。

三、樣液接種方法：

① 從吸管筒沿筒上壁抽出吸管，在火焰旁吹洗吸耳球同時(shí)在吸管尾端插上吸耳球后，從吸管尾端至*快速經(jīng)過火焰，并且排空吸管里殘留的水，如圖

② 吸管拔出均質(zhì)袋樣液內(nèi)的深度不超越2.5cm處，準(zhǔn)確吸取樣品勻液，吸管尖不要碰著袋口。吸入的液體應(yīng)先高于所要求的刻度, 然后提起吸管使其*分開液面并貼在袋內(nèi)將液體調(diào)至所要求的刻度。

1ml、1ml、1m、0.2ml無菌操作區(qū)分以2～4s內(nèi)完全注入已標(biāo)識(shí)清楚的細(xì)菌數(shù)、大腸菌群、EC以及金黃色葡萄球菌平皿中，接種后迅速震蕩平均，如圖

③ 假設(shè)在接種前，某一樣品液體放置超越3 min，應(yīng)重新均質(zhì)；為了驗(yàn)證稀釋液、培育基、平皿、吸管等用具無菌需做空白對(duì)照。

四、傾注倒藥方法

右手持培育基三角瓶（已放50-60℃的水浴中恒溫）置火焰旁邊，用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫，迅速倒人培育基約15ml，加蓋后悄然搖動(dòng)培育皿，使培育基平均散布在培育皿底部，然后平置于桌面上；也可將平皿放在火焰左近的桌面上用左手的拇指和食指翻開培育皿，再注入培育基，搖勻，如圖

留意

1

培育基在50-60℃水浴中的保溫時(shí)間不要超越4h；從采樣末尾到分注培育基操作限于20min以內(nèi)。

2

涂布的平皿外表需枯燥（枯燥不充沛易發(fā)作菌落分散，有冷凝水不利于細(xì)菌分別并且會(huì)招致細(xì)菌繁衍使結(jié)果失真；枯燥過火，會(huì)招致培育基裂開，不能用；枯燥適宜，則樣液吸收完全、快）。

3

玻璃器皿的外表容易被細(xì)菌吸附，所以菌液注入平皿后應(yīng)盡快將平皿內(nèi)的樣液和瓊脂培育基充沛混合，否則細(xì)菌不容易分散。混合方法是將平皿傾斜和旋轉(zhuǎn)使之充沛混合，但要留意不要讓培育基從培育皿內(nèi)溢出，且不要粘附在平皿壁和蓋上。

五、平皿培育

（1） 將平皿倒置放入恒溫培育箱中，平皿間要留有空隙停止空氣流通，使培育物的溫度盡快與培育箱溫度到達(dá)分歧，依照規(guī)則的溫度和時(shí)間停止培育并堅(jiān)持一定的濕度，經(jīng)48h培育的瓊脂培育基的失重不得超越15％，如圖

（2）斜面、高層斜面、液體培育基立在試管架上放入恒溫培育箱中，按所規(guī)則的時(shí)間溫度停止培育，如圖

課題范圍：微生物學(xué)，化學(xué)，生命迷信，食品迷信與工程